Diabetologia：激活但功用受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失呼吸道自身特异性到消失1DF心血管疾病病理症状的困难重重亲率在成人时期就有极佳的描绘出，多个呼吸道自身特异性非典型的成人中的有70%在人体内转换后10年末患上心血管疾病，而随访15年的成人这一%缩减到84%。相较之下，占病理1DF心血管疾病一半以上的DF1DF心血管疾病的发病机制还从未获得应有的科学研究。

越来越多的人开始可用仍须系统来度量1DF心血管疾病的困难重重：个体在消失多种呼吸道自身特异性时进入第1过渡阶段，消失血糖出现异常时进入第2过渡阶段，消失症状时进入第3过渡阶段。一些多发呼吸道自身特异性非典型的个体，在1期和2期，困难重重较快，并发展为发病的1DF心血管疾病。我们之前描绘出了一小组在首次探测到多种呼吸道自身特异性抽取后数10年无心血管疾病的极迟困难重重者，这小组病患者人数极多，但形态非常明确。随后，我们发现呼吸道自身蛋白特异性CD8+T线粒体反应在困难重重快速的病患者中的大体不实际上，但在最近发病和普遍实际上的心血管疾病病患者中的很不易探测到。这可能表明，与困难重重病患者相较，这些病患者自身致病的平衡增强。

早期科学研究表明，尽管平衡性T线粒体(Treg)可用量正常，但心血管疾病病患者实际上一些机能瑕疵，其中的包括对IL-2的反应操控能力降低。此外，心血管疾病病患者中的的effectCD4+T线粒体可能对平衡更加具抵抗性，表现为effectT线粒体的诱导减弱，自然产生的Treg和体外产生的诱导Treg，以及蛋白漫长的CD4+T线粒体中的IL-2反应减弱。本科学研究的目的是描绘出了CD4+平衡性T线粒体(Treg)在一小群极快速困难重重者中的的形态，他们的岁数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX科学研究是一项以人群为基础的交叉科学研究，在21岁以下确诊的病患者亲属中的检查1DF心血管疾病的小心原因。我们之前描绘出了长期快速困难重重者的形态，他们保持多重呼吸道自身特异性非典型超过10年，但从未消失心血管疾病的病理症状，迟性或非开展性自身免疫。随后，10名继续保持无心血管疾病并希望发放大量体内抽取的快速困难重重者设为T和B线粒体机能科学研究。在目前的科学研究中的，8名迟困难重重者(SP小组)，中的位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁中间的呼吸道自身特异性非典型。所有的参与者都东南面1DF心血管疾病困难重重的1期，尽管一些人随后失去了呼吸道自身特异性对某些蛋白的非典型，然而，一名病患者并未东南面2期数6年，但从未消失病理症状，一名病患者被诊断为心血管疾病，该患者72岁，在采集实验抽取时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在科学研究小组中的对该NADP开展了分开危险性评估。裂解外周血单个核线粒体(PBMCs)，运用于多参数流式线粒体拳法和T线粒体诱导试验性危险性评估NADP中的Treg的增益、表DF和机能。可用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和紧接)开展无统筹聚类科学研究，危险性评估Treg表DF。

结果：与健康NADP相较，来自迟困难重重体的知觉CD4+T线粒体的统筹聚类看出，激来生的知觉CD4+ Treg增益缩减，与糖皮质激素诱导的TNFR关的线粒体内(GITR)强调缩减有关。一名HbA1c升高的病患者与困难重重快速者和给定的比对小组相较，Treg谱有所不尽相同。机能于数，与健康NADP相较，来自快速困难重重体的Treg介导的CD4+effectT线粒体诱导明显受损。表现为对effectCD4+T线粒体CD25和CD134强调的诱导缩减。

布1 深入的表DF科学研究看出，CD4+Treg亚DF在迟困难重重链表中的缩减。由FlowSOM转化的Treg室，聚集地在来自所有NADP的来生CD4+CD45RA -线粒体上。根据标示出物强调鉴定出10个元簇:知觉T线粒体_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T线粒体;HLA-DR + GITR +知觉T线粒体;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)可用9个不尽相同Treg标示出转化的10个元簇的MST。每个端口代表一个坦克部队(100个坦克部队)，更加大的元坦克部队(10个元坦克部队)在端口小组周围绘布。每个端口中的的饼布暗示单个标示出的强调级别。(b)每个元聚类的热布，以看出整体标示出强调。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)转化布，以及FlowSOM标记的每个元簇的沙质。(e-l)相比稀土元素为每个metacluster罐新线布(稀土元素> 0.05%)确定为HD和SP小组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T线粒体(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T线粒体(l)。浅红色红色代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检查。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 可用CITRUS的预测模DF证实，Treg增益的缩减是困难重重快速的标志。分级门控(a - f)和柑橘科学研究(g-k)比较SP参与者和给定的HD参与者在CD4+CD45RA−T线粒体上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族裔的特色布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3掺入，然后通过HLA-DR和GITR强调开展裂解，模拟FlowSOM族裔。(b) HD(黑点)和SP(虎纹)小组以及NADPSP 606(浅红色)中的CD25+ cd127的增益统计布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控兄集的罐新线布;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇棒状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调风速着色，箭头值得注意的簇被标记为SP和HD链表中间的不尽相同。(j)罐新线布看出了在SP(虎纹)和HD(灰点)小组中的，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的相比稀土元素(%)。(k)直方布看出每个簇的表DF(粉红色)和Treg标示出相比强调与背景强调(红色);上列，CPUTreg_3;一个大动身，CPUTreg_4。背景与所有其他簇中的标示出的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检查

布3 与健康献血者相较，困难重重快速者知觉treg的GITR缩减。每个知觉CD4+T线粒体元簇(知觉T线粒体_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T线粒体;HLA-DR + GITR +知觉T线粒体;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)探测每个强调标示出的波动。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的强调热布(sp606不包括在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇中的所有HD(白色)、所有SP(红色)和SP 606(浅红色)的FlowSOM GITR强调联接，看出直方布(c)和统计布(d)。Wilcoxon配对符号秩和检查，p< 0.07(浅红色)所有NADP包括，p< 0.05(红色)NADPSP 606和给定的HD不包括在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR强调，从分级门控，从所有HD(白色)、所有SP(红色)和SP 606(浅红色)联接，看出直方布(e)和统计布(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检查

布4 来自快速困难重重的CD4+ treg线粒体操控effectCD4+T线粒体的操控能力降低。SP小组用红色的新线和红色暗示，HD小组用银色的新线和红色暗示，浅红色的新线/红色暗示NADPsp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T线粒体开展分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标示出为CFSE, Treg按观察的%滴定。用抗CD3 /28微珠来生化线粒体，人才3天后开展流式线粒体拳法探测。(a-d)与CD4+需要的话者相比应的treg人才(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者人才。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE诱导百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱导百分比。可用非典型比对(激来生的响应线粒体不含treg)近似值诱导百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差科学研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

布5 effectCD4+T线粒体对快速困难重重的T线粒体来生化的诱导更加敏感。SP小组用红色的新线和红色暗示，HD小组用银色的新线和红色暗示，浅红色的新线/红色暗示NADPsp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T线粒体开展分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标示出，treg按观察的%滴定。用抗CD3 /28微珠来生化线粒体，人才3天后开展流式线粒体拳法(CD25反染)和线粒体因兄科学研究。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同人才。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE诱导百分亲率(b)。(c,d) CD25诱导百分亲率(c)和CD134诱导百分亲率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才中的的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差科学研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自快速困难重重兄的来生化知觉CD4+Treg在GITR强调中的获得了扩展和珍贵，务实了进一步科学研究Treg在1DF心血管疾病危险性个体中的的异质性的必要性。

来历来历：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28